《臨床分子診斷學》著眼于介紹當今國際分子診斷學理論及技術(shù)在臨床應用的最新成果，重點論述分子診斷技術(shù)，尤其是發(fā)展中的分子診斷微型化技術(shù)（如生物芯片技術(shù)、DNA傳感器技術(shù)等）、生物質(zhì)譜技術(shù)等新型技術(shù)在感染性疾病、遺傳性疾病、腫瘤疾病、藥物遺傳學和藥物基因組學、公共衛(wèi)生安全、生殖和優(yōu)生遺傳學、法醫(yī)學等領(lǐng)域的應用。主要包括分子診斷技術(shù)和分子診斷的臨床應用兩大部分。在分子診斷技術(shù)方面，密切結(jié)合我國廣泛應用的分子診斷技術(shù)，主要介紹核酸提取技術(shù)、實時PCR技術(shù)、雜交技術(shù)、DNA測序技術(shù)、光譜技術(shù)、色譜技術(shù)、生物質(zhì)譜技術(shù)、生物信息學技術(shù)等。在分子診斷的臨床應用方面，主要介紹分子診斷技術(shù)在感染性疾病、單基因疾病、多基因疾病、腫瘤疾病、耐藥性方面、個體化治療等方面的應用。在分子診斷的遺傳學咨詢、公共衛(wèi)生安全、分子診斷實驗室質(zhì)量管理等方面也予以了討論。
《臨床分子診斷學》可作為臨床醫(yī)師、檢驗醫(yī)師、從事分子診斷技術(shù)的科研人員以及醫(yī)學及生物技術(shù)院校學生的參考用書。
第1章 概論
1.1 分子診斷學的形成與發(fā)展
1.2 分子診斷學的應用領(lǐng)域
1.3 臨床分子診斷學的發(fā)展趨勢
第2章 分子診斷樣品制備技術(shù)
2.1 檢測樣品的采集和保存
2.2 檢測樣品的處理
2.3 核酸的分離與純化
2.4 蛋白質(zhì)樣品的制備技術(shù)
第3章 分子克隆技術(shù)
3.1 工具酶
3.2 載體
3.3 分子克隆的基本步驟
3.4 克隆基因的表達
第4章 核酸擴增技術(shù)
4.1 聚合酶鏈式反應技術(shù)
4.2 PCR衍生技術(shù)
4.3 實時熒光定量PCR技術(shù)
4.4 恒溫擴增技術(shù)及其他技術(shù)
4.5 基因甲基化的PCR檢測
4.6 臨床基因擴增檢驗實驗室管理與質(zhì)量控制
第5章 核酸分子雜交技術(shù)
5.1 核酸分子雜交的基礎(chǔ)理論
5.2 核酸探針的制備技術(shù)
5.3 核酸探針的標記技術(shù)
5.4 核酸雜交方法
5.5 核酸分子雜交的應用
第6章 DNA測序技術(shù)
6.1 化學降解法
6.2 雙脫氧鏈末端終止法
6.3 新一代測序技術(shù)
6.4 基于納米孔的單分子測序技術(shù)
第7章 生物芯片技術(shù)
7.1 基因芯片
7.2 反向斑點雜交低密度芯片
7.3 液相基因芯片
7.4 基因芯片在臨床分子診斷中的應用
第8章 DNA生物傳感器技術(shù)
8.1 傳感器導論
8.2 電化學DNA生物傳感器
8.3 電化學DNA生物傳感器設(shè)計進展
8.4 電化學DNA生物傳感器技術(shù)在臨床分子診斷中的應用
8.5 展望
第9章 色譜技術(shù)
9.1 柱色譜
9.2 薄層色譜
9.3 紙色譜
9.4 毛細管電泳色譜
9.5 高效液相色譜
第10章 光譜技術(shù)
10.1 紫外——可見分光光度分析
10.2 熒光分光光度計分析
10.3 紅外光譜技術(shù)
10.4 拉曼光譜分析技術(shù)
第11章 生物質(zhì)譜技術(shù)
11.1 生物質(zhì)譜的原理和發(fā)展
11.2 質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)
11.3 生物質(zhì)譜的應用
第12章 感染性疾病的分子診斷
12.1 肝炎病毒的分子檢測及其分型
12.2 性病病原微生物的分子檢測
12.3 結(jié)核桿菌的分子檢測
12.4 HIV的分子診斷
12.5 傳染性非典型肺炎
12.6 甲型HIN1流感
12.7 手足口病
12.8 其他病原微生物的分子檢測
第13章 單基因疾病的分子診斷
第14章 多基因疾病的分子診斷
第15章 分子診斷在產(chǎn)前診斷中的應用
第16章 腫瘤疾病的分子診斷
第17章 耐藥基因的分子診斷
第18章 分子診斷的遺傳學咨詢
第19章 分子診斷在公共衛(wèi)生安全與預防醫(yī)學中的應用
第20章 分子診斷在移植配型和法醫(yī)學鑒定中的應用
第21章 藥物基因組學在個體化醫(yī)學診斷中的應用
第22章 代謝組學在分子診斷中的應用
第23章 蛋白質(zhì)組學在分子診斷中的應用
第24章 生物信息學在分子診斷中的應用
第25章 臨床分子實驗室的質(zhì)量管理
附錄
參考文獻
4.1.6.6 物理原因 缺失，影響引物與模板特異性結(jié)合，或因靶序列某段缺失使引物與模板失去互補序列，其PCR擴增是不會成功的。
4.1.6.7 靶序列變異
如靶序列發(fā)生突變或大片段的交叉污染，導致假陽性。這種假陽性可用以下方法解決：操作時應小心輕柔，防止將靶序列吸人加樣槍內(nèi)或濺出離心管外。除酶及不能耐高溫的物質(zhì)外，所有試劑或器材均應高壓消毒。所用離心管及進樣槍頭等均應一次性使用。必要時，在加標本前，反應管和試劑用紫外線照射，以破壞存在的核酸�？諝庵械男∑魏怂嵛廴�，這些小片段比靶序列短，但有一定的同源性，可互相拼接，與引物互補后，可擴增出PCR產(chǎn)物，而導致假陽性的產(chǎn)生，可用巢式PCR方法來減輕或消除。
4.1.6.8 假陽性
出現(xiàn)的PCR擴增條帶與目的靶序列條帶一致，有時其條帶更整齊，亮度更高。
引物設(shè)計不合適：選擇的擴增序列與非目的擴增序列有同源性，因而在進行PCR擴增時，擴增出的PCR產(chǎn)物為非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出現(xiàn)假陽性，需重新設(shè)計引物。
靶序列或擴增產(chǎn)物的交叉污染，這種污染有兩種原因：①整個基因組或變性對PCR擴增來說相當重要，如變性溫度低、變性時間短，極有可能出現(xiàn)假陰性。②退火溫度過低，可致非特異性擴增而降低特異性擴增效率；退火溫度過高則影響引物與模板的結(jié)合而降低PCR擴增效率。有時還有必要用標準的溫度計檢測一下擴增儀或水溶鍋內(nèi)的變性、退火和延伸溫度，這也是PCR成敗的關(guān)鍵之一。
4.1.6.9 出現(xiàn)非特異性擴增帶
PCR擴增后出現(xiàn)的條帶與預計的大小不一致，或大或小，或者同時出現(xiàn)特異性擴增帶與非特異性擴增帶。非特異性條帶的出現(xiàn)，其原因有：①引物與靶序列不完全互補或引物聚合形成二聚體。②Mg2+離子濃度過高、退火溫度過低、PCR循環(huán)次數(shù)過多。③酶的質(zhì)和量。往往一些來源的酶易出現(xiàn)非特異條帶而另一來源的酶則不出現(xiàn)，酶量過多有時也會出現(xiàn)非特異性擴增。
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